生物化学考研整理第二十一章DNA重组及重组DNA技术(生物化学考研重点知识归纳背诵)

第二十一章：dna重组及重组dna技术
第二节：重组dna技术
重组dna技术=分子克隆=dna克隆=基因克隆：利用限制性内切酶，dna连接酶等，将经过剪接的外源dna与载体dna连接并转化到特定的宿主细胞中进行dna基因表达的技术，产生人们所需要的产物。
1.目的基因的获取：主要包括化学合成法，dna文库法，cdna文库法和pcr技术
2.载体的选择与构建：目的基因要进入受体细胞，必须有一个载体将其带入细胞内，并随外源dna一起复制和表达
3.目的基因与载体的连接：连接方式主要有黏性末端连接，平端连接，人工接头连接等。
4.转化：外源dna进入受体细胞并使它获得新的遗传特性的过程为转化，此外还有转染，转导等方法。
5.重组体筛选：由于细胞转化效率较低，需要从大量的宿主细胞中筛选出带有重组体的细胞
6.外源基因的表达：将导入的外源基因利用宿主的遗传信息表达系统复制、转录，表达有活性的目的蛋白
补充：
酵母双杂交原理：
真核转录因子的dna结合区b

d和转录结合区ad在功能和实质上都是可分的，bd能把蛋白定位到基因组特定dna序列上，ad能够使转录装置激活基因转录。将两个目的蛋白分别与ad和bd融合产生新的融合蛋白，如果这两个目的蛋白能够互相作用，则该相互作用会促使ad和bd相互靠近而产生有活性的转录因子，进而激活事先构建到酵母基因组中报告基因的转录。
基因组学：基因组学是阐明整个基因组结构，结构与功能的关系以及基因之间相互作用的科学。